NGS高質量接頭
發布時間:2022-06-02NGS高質量接頭
構建基因文庫是整個高通量測序（NGS）過程中尤為關鍵的一步，基因文庫的質量將直接影響后續測序工作。通常，文庫構建方案要求對片段化的DNA進行末端修復，并在其兩端連上特定序列的接頭（Adapter），擴增以滿足高通量平臺測序的讀取要求。高質量的接頭，有利于與片段DNA源的連接，提高文庫構建效率。
百力格憑借多年DNA合成經驗，擁有優化的合成工藝、嚴格的質量控制和防污染控制，能最大程度的保證接頭連接效率。
接頭種類
1. UDI接頭 (Unique Dual Index)：UDI接頭可以大幅度降低Illumina測序過程中因為機器測序或者實驗過程引入的交叉污染，從而盡可能避免測序數據錯誤。
2. UMI接頭（Unique Molecular Identifiers）：UMI接頭包含P5 Index、P7 Index和UMI元件，其中，UMI分子標簽可以設計為完全隨機的核苷酸鏈、部分簡并核苷酸鏈或者固定核苷酸鏈。根據UMI標簽所在的位置，可分為單端UMI（10 nt）接頭和雙端UMI（5-8 nt）接頭。
3. 轉座酶接頭：轉座酶法建庫技術的關鍵是Tn5轉座子，Tn5轉座子是一種細菌轉座子，本質是一段含有若干抗性基因和編輯轉座酶基因的DNA片段。Tn5用于文庫構建時，可將DNA片段化、末端修復、接頭連接等多步反應轉變為一步反應，縮短建庫時間。
成品接頭+定制化接頭
@工業化DNA合成平臺，打造1/1,000,000交叉污染率接頭庫
成品接頭
優勢：
特有的Index序列保證接頭堿基平衡；
經過改良的退火工藝保證接頭的連接效率和穩定性；
質量控制：
如圖所示為Illumina?平臺成品雙端長接頭退火圖，接頭接近于完全退火。
定制化接頭
優勢：
特殊的合成工藝保證接頭磷酸修飾的穩定性，對每批次進行嚴格的質量控制與功能驗證；
嚴格的質量控制保證接頭引物極低交叉污染率、極低堿基錯誤率、高純度與精準定量；
如圖為60-70 bp接頭序列HPLC純度檢測，經過百力格特有工藝純化，69 bp含磷酸化修飾和硫代修飾的接頭，5 nmol規格HPLC純度大于98.5%，CV值為0.29%；25 nmol規格HPLC純度檢測可以達到99.01%，CV值為0.36%。
